홍라이프 계산기혈구계산판 세포 수 계산기 쉽게 이해하기 — 개념과 원리
혈구계산판은 깊이가 정해진 계수실과 눈금 격자가 새겨진 두꺼운 유리 슬라이드입니다. 보통 트립판 블루와 섞은 세포를 현미경으로 보면서 몇 개의 칸에 있는 세포를 세면 세포 농도, 생존율, 살아 있는 세포의 총수를 구할 수 있습니다. 플레이트 접종, 계대, 형질 주입이나 유세포 분석 준비 전에 꼭 필요한 값입니다.
계산 방법
- 생세포 농도(cells/mL) = (센 생세포 수 ÷ 센 칸 수) × 희석 배수 × 10⁴
- 생존율 = 생세포 ÷ (생세포 + 사세포) × 100%
- 총 생세포 수 = 생세포 농도 × 전체 부피(mL)
여기서 칸은 표준 개량형 노이바우어 계산판의 네 모서리에 있는 1 mm × 1 mm 큰 칸입니다. 희석 배수에는 트립판 블루 희석도 포함되며, 세포와 염료를 같은 부피로 섞으면 2입니다.
원리
큰 칸 하나의 넓이는 1 mm²이고 계수실 깊이는 0.1 mm이므로, 칸 위 액체의 부피는 0.1 mm³ = 0.1 µL = 10⁻⁴ mL입니다. 따라서 칸당 평균 세포 수는 10⁻⁴ mL에 든 세포 수이고, 10⁴을 곱하면 mL당 세포 수가 됩니다. 트립판 블루는 세포막이 온전한 세포에는 들어가지 못하고 죽은 세포에만 들어가 파랗게 물들이므로, 살아 있는 세포는 밝고 투명하게 보입니다. 세포 계수는 표본 추출이어서 푸아송 통계를 따르며, 상대 오차는 약 1 ÷ √(센 세포 수)입니다.
예제 풀이
- 입력값: 4칸에서 생세포 180개, 사세포 20개, 희석 배수 2, 전체 부피 10 mL입니다.
- 칸당 평균 생세포 = 180 ÷ 4 = 45개입니다.
- 생세포 농도 = 45 × 2 × 10⁴ = 900,000 cells/mL입니다.
- 생존율 = 180 ÷ 200 × 100 = 90%입니다.
- 총 생세포 수 = 900,000 × 10 = 9,000,000개입니다.
| 센 칸 수 | 생세포/mL |
|---|---|
| 1 | 3,600,000 |
| 2 | 1,800,000 |
| 3 | 1,200,000 |
| 4 | 900,000 |
| 5 | 720,000 |
| 6 | 600,000 |
| 8 | 450,000 |
결과 해석
활발히 자라는 건강한 배양은 생존율이 높아 90%를 넘는 경우가 많고, 생존율이 떨어지면 스트레스, 과밀, 거친 취급을 의심합니다. 180개를 세었다면 계수 오차는 약 1 ÷ √180 ≈ 7%입니다. 몇백 개 정도를 세면 정밀도가 적당하며, 칸당 세포가 너무 적으면 칸을 더 세고 세포가 겹치면 더 희석하시기 바랍니다.
흔한 실수
- 트립판 블루 희석을 희석 배수에 넣지 않는 경우
- 가운데 작은 칸을 세면서 큰 칸용 10⁴ 계수를 쓰는 경우
- 네 변의 경계선에 걸친 세포를 모두 세어 과대평가하는 경우
- 트립판 블루에 너무 오래 두어 살아 있는 세포까지 염색되는 경우
자주 묻는 질문
큰 칸 9개를 모두 세면 어떻게 하나요?
칸 수에 9를 넣으면 됩니다. 칸당 평균과 10⁴ 계수는 그대로입니다.
선에 걸친 세포는 어떻게 세나요?
위쪽과 왼쪽 선에 걸친 세포는 세고, 아래쪽과 오른쪽 선에 걸친 세포는 빼는 규칙을 흔히 씁니다.
출처: Strober, W., Trypan blue exclusion test of cell viability, Current Protocols in Immunology (Wiley) · Freshney, R. I., Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications (Wiley)