홍라이프 계산기올리고 재용해 계산기 쉽게 이해하기 — 개념과 원리
이 계산기는 동결 건조된 올리고뉴클레오타이드를 원하는 몰 농도로 녹이려면 완충액을 얼마나 넣어야 하는지 알려 줍니다. 사양서의 분자량을 넣으면 올리고 질량, 질량 농도, 1µL당 분자 수도 구합니다. 프라이머와 프로브를 다루는 분자생물학 실험실에서 씁니다.
계산 방법
부피(µL) = 양(nmol) × 1,000 ÷ 목표 농도(µM)
질량(µg) = 양(nmol) × 분자량 ÷ 1,000
질량 농도(ng/µL) = 농도(µM) × 분자량 ÷ 1,000
µL당 분자 수 = 농도 × 10⁻¹²mol/µL × N_A
- 1µM = 1pmol/µL = 1nmol/mL, N_A = 6.02214076 × 10²³mol⁻¹입니다.
원리
농도는 양을 부피로 나눈 값이므로 필요한 부피는 양을 원하는 농도로 나눈 값입니다. 1µM은 정확히 µL당 1pmol이므로 나노몰은 1,000을 곱해 마이크로리터로 바뀝니다. 분자량은 몰과 그램을, 아보가드로 수는 몰과 분자 개수를 이어 줍니다.
예제 풀이
기본값인 튜브의 양 25.4nmol, 목표 100µM, 분자량 6,100g/mol로 계산합니다.
- 부피 = 25.4 × 1,000 ÷ 100 = 254µL = 0.254mL입니다.
- 질량 = 25.4 × 6,100 ÷ 1,000 = 154.9µg입니다.
- 질량 농도 = 100 × 6,100 ÷ 1,000 = 610ng/µL입니다.
- µL당 분자 수 = 100 × 10⁻¹² × 6.022 × 10²³ = 60,220,000,000,000개(6.02 × 10¹³)입니다.
| 목표 농도 (µM = pmol/µL) | 넣을 버퍼 (µL) |
|---|---|
| 25 | 1,016 |
| 50 | 508 |
| 75 | 338.7 |
| 100 | 254 |
| 125 | 203.2 |
| 150 | 169.3 |
| 200 | 127 |
결과 해석
100µM 원액은 프라이머에 흔히 쓰는 농도이며, 작업 용액은 이를 묽혀 흔히 10µM으로 만듭니다. 마른 덩어리가 바닥에 모이도록 뚜껑을 열기 전에 튜브를 원심 분리하고, 완충액을 넣은 뒤에는 잘 섞으십시오. 녹인 뒤 바로 쓰지 않을 원액은 여러 개로 나눠 보관하면 반복 해동을 줄일 수 있습니다.
흔한 실수
- nmol 대신 µg 질량을 넣는 경우
- µM과 mM을 혼동해 1,000배 차이가 나는 경우
- 뚜껑을 열기 전에 튜브를 원심 분리하지 않는 경우
자주 묻는 질문
100µM 원액을 만들려면 완충액이 얼마나 필요합니까?
튜브의 nmol 값에 10을 곱하면 µL가 됩니다.
1µM이 1pmol/µL인 이유는 무엇입니까?
1L가 100만 µL이므로 L당 1µmol은 µL당 1pmol이기 때문입니다.
물과 TE 완충액 중 무엇을 씁니까?
오래 보관하려면 완충 용액을 쓰는 실험실이 많으므로 실험 절차를 따르십시오.
10µM 작업 용액은 어떻게 만듭니까?
100µM 원액을 10배로 묽힙니다.
분자량은 어디서 확인합니까?
올리고와 함께 오는 사양서에 서열에서 계산한 분자량이 적혀 있습니다.
출처: BIPM, SI Brochure, 9th edition (2019), Avogadro constant; standard definition of molar concentration c = n/V